不朽情缘MG为您的生物医学研究提供全面的慢病毒感染预实验方案。以下是基于24孔培养板的实验步骤示例，旨在帮助科研人员高效地进行细胞感染实验。

实验材料准备

本实验需准备以下材料：培养基、24孔培养板、移液枪及枪头、EP管、细胞计数板、冰盒和废液缸等。根据目的细胞的特点，适当添加Polybrene以提高感染效率。

Day 1：细胞准备

将细胞培养至对数生长期，使用胰酶消化后进行细胞计数。根据计数结果，每孔接种5×10⁴个细胞，并添加500µL的细胞培养液。通常情况下，H1299或293T细胞在感染后3天内能达到80%-90%的融合度。请根据不同目的细胞的生长速度调整接种量，以确保在感染后3天内实现预期的融合度。

Day 2：慢病毒颗粒准备与感染

(1) 先计算所需的慢病毒颗粒量，然后将冻存于-80℃的慢病毒颗粒取出并进行冰浴融化。

(2) 观察细胞生长状态，确保其状态良好后进行感染实验：

• A：使用移液枪小心吸去24孔板中的旧培养液，再添加新鲜的完全培养液。
• B：将计算好的慢病毒颗粒液注入细胞中，并轻柔混匀。
• C：将混合后的细胞培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中，过夜培养。

Day 3：培养液更换

感染12-16小时后，吸出含慢病毒颗粒的培养液，重新向培养板添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，继续培养。注意，目的细胞的感染时长需视情况调整，部分细胞不宜感染超过12小时。

Day 4：继续培养与观察

继续培养细胞，并定期观察其生长状态有无异常。

Day 5：评估感染效率

使用70%乙醇清洁24孔培养板外部，随后盖紧并翻转，在倒置荧光显微镜下观察荧光，评估慢病毒颗粒的感染效率。如病毒载体所携带的基因表达时间较长，可适当延长观察至72或96小时。

通过观察荧光情况，科研人员可以初步确定目标细胞的最佳MOI值。这一过程将为相关生物医学研究提供重要的数据支持。

选择不朽情缘MG，助力您的实验成功！